سلول های بنیادی مزانشیمی آمنیوتیک انسانی تکثیر لنفوسیت های آلوژنیک را مهار و ترشح اینترفرون γ را کاهش می دهد

تاریخ انتشار: یکشنبه 17 اسفند 1393 | امتیاز: Article Rating

هدف: بررسی اثرات سلول های بنیادی مزانشیمی آمنیوتیک انسانی  (hAMSCs) برعملکرد لنفوسیت ها در شرایط آزمایشگاهی است.

 مواد و روش ها: روش هضم آنزیمی برای جداسازی و کشت hAMSCs مورد استفاده قرار گرفت. آنتی بادی های مونوکلونال ضد انسانی موشی نشاندار با فلوئورپور برای شناسایی آنتی ژن سطح سلول با روش فلوسیتومتری مورد استفاده قرار گرفت. بیان ویمنتین و آنتی ژن جنینی ویژه stage -4 (SSEA-4) با استفاده از روش ایمونوفلورسانس مشاهده شد. لنفوسیت های جدا شده توسط(ConA) concanavalin  تحریک شد، و پس از آن 4 10× 1 ، 4 10× 5 ، 5 10× 1 سلول بنیادی مزانشیمی آمنیوتیک با لنفوسیت های  تحت تیمار با ConA  هم کشتی داده شدند. تکثیر لنفوسیت ها  با روش CCK-8 اندازه گیری شد و سطح IFN-γ  محیط رویی با ELISA مشخص شد.

نتایج:   5 میکروگرم / میلی لیتر ConA می تواند سبب تکثیر لنفوسیت ها شود.  hAMSCs  تکثیر القا شده لنفوسیت ها توسط  ConA را درهم کشتی مهار کرده  و با افزایش تعداد  hAMSCs،  این اثر مهاری واضح تر بود. هنگامی که سلول ها به مدت 72 ساعت کشت داده شدند، آزمایش CCK-8 نشان داد که تعداد لنفوسیت های تحت تیماربا ConA به تنهایی به طور قابل توجهی بالاترازلنفوسیت های  تحت تیماربا ConA هم کشتی یافته با hAMSCs بود. بهترین گروه مهاری یعنی تعداد 6 10 × 1 لنفوسیت هم کشتی یافته با 105× 1  hAMSCs ، بعد از 72 ساعت برای اندازه گیری ترشح IFN-γ در محیط رویی توسط  ELISA  انتخاب شد. سطح IFN-γ به طور قابل توجهی کمتر از گروه ساده تحریک شده با ConA  بود.

نتیجه گیری:  سلول های بنیادی مزانشیمی آمنیوتیک انسانی  می تواند تکثیر لنفوسیت را مهار و ترشح IFN-γ  تحت القای ConA را در شرایط in vitro کاهش دهد.

Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 2015 Mar;31(3):333-7.

[Human amniotic mesenchymal stem cells inhibit allogeneic lymphocyte proliferation and reduce the secretion of interferon γ].

[Article in Chinese]

Song J1Cong S1Li Y1Bai L2Cao G1.

 

Abstract

Objective To investigate the effects of human amniotic mesenchymal stem cells (hAMSCs) on the function of lymphocytes in vitro. Methods Enzymatic digestion method was used to isolate and culture hAMSCs. Fluorophore-labeled mouse anti-human monoclonal antibodies were used to identify cell surface antigens with flow cytometry. The expressions of vimentin and stage specific embryonic antigen-4 (SSEA-4) were detected by immunofluorescence staining. Isolated lymphocytes were stimulated by concanavalin (ConA), and then 1×10(4), 5×10(4), 1×10(5) hAMSCs were co-cultured with the ConA-treated lymphocytes. Lymphocyte proliferation was measured by CCK-8 assay and the supernatant level of IFN-γ was determined by ELISA. Results ConA (5 μg/mL) could cause lymphocyte proliferation. hAMSCs inhibited lymphocyte proliferation induced by ConA in co-culture conditions, and with the increasing number of hAMSCs, the suppressing effect was more obvious. When the cells were cultured for 72 hours, CCK-8 assay showed that the number of lymphocytes treated with ConA alone was significantly higher than that of ConA-treated lymphocytes co-cultured with hAMSCs. The best inhibitory group 1×10(6) lymphocytes co-cultured with 1×10(5) hAMSCs was selected to measure supernatant IFN-γ secretion by ELISA after 72 hours. The level of IFN-γ was significantly lower than that in the simple ConA-stimulated group. Conclusion HAMSCs could inhibit lymphocyte proliferation and reduce IFN-γ secretion induced by ConA in vitro.

PMID: 25744838
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان