پروتکل برای تبدیل مستقیم فیبروبلاست های جنینی موش به سلول های بنیادی تروفوبلاستی

تاریخ انتشار: شنبه 27 شهریور 1395 | امتیاز: Article Rating

سلول های بنیادی تروفوبلاستی(TSCs) حاصل اولین تعیین سرنوشت سلولی در تکوین پستانداران هستند. آن ها می توانند در شرایط آزمایشگاهی کشت شوند و توانایی خودنوزایی و تمایز به همه زیرنوع های رده تروفوبلاستی را حفظ کنند ومعادل جمعیت سلول های بنیادی هستند که در in vivo به بخش جنینی جفت تبدیل می شوند. بنابراین، سلول های بنیادی تروفوبلاستی مدل منحصر بفردی را برای مطالعه تکوین جفت و تعیین سرنوشت سلولی  سلول های جنینی در برابر سلول های خارج جنینی در آزمایشگاه فراهم می کنند. از مرحله بلاستوسیست به بعد، یک سد اپی ژنتیکی مجزا شامل متیلاسیون DNA و مدیفیکاسیون هیستون شدیدا هر دو رده را از هم جدا می کند. در این جا، ما پروتکلی را توصیف کرده ایم که به طور کامل این سد رده ای را بوسیله بیش بیان گذرای تنظیم کننده های کلیدی تروفوبلاستی Tfap2c، Gata3، Eomes وEts2 در فیبروبلاست های جنینی موش برطرف می کند. سلول های بنیادی تروفوبلاستی القایی قادر به خودنوزایی هستند و تقریبا با سلول های بنیادی تروفوبلاستی مشتق از بلاستوسیست ها از نظر مورفولوژی، بیان مارکرهای ژنی و الگوی متیلاسیون مشابه هستند. ارزیابی های عملکردی in vivo و in vitro ثابت کرد که این سلول ها قادر به تمایز در امتداد رده های تروفوبلاستی تولید کننده سلول های پلی پلوئیدی غول پیکر تروفوبلاستی و کایمرا کردن جفت در زمان تزریق به بلاستوسیست هستند. القای سلول های بنیادی تروفوبلاستی از بافت های سوماتیک راه های جدیدی را برای مطالعه ویژگی های ژنتیکی و اپی ژنتیکی رده های خارج جنینی باز می کند و امکان تولید رده های سلول های بنیادی تروفوبلاستی بدون تخریب جنین مربوطه را فراهم می کند.

J Vis Exp. 2016 Jul 25;(113). doi: 10.3791/54277.

Protocol for the Direct Conversion of Murine Embryonic Fibroblasts into Trophoblast Stem Cells.

Kubaczka C1, Schorle H2.

Abstract

Trophoblast stem cells (TSCs) arise as a consequence of the first cell fate decision in mammalian development. They can be cultured in vitro, retaining the ability to self-renew and to differentiate into all subtypes of the trophoblast lineage, equivalent to the in vivo stem cell population giving rise to the fetal portion of the placenta. Therefore, TSCs offer a unique model to study placental development and embryonic versus extra-embryonic cell fate decision in vitro. From the blastocyst stage onwards, a distinct epigenetic barrier consisting of DNA methylation and histone modifications tightly separates both lineages. Here, we describe a protocol to fully overcome this lineage barrier by transient over-expression of trophoblast key regulators Tfap2c, Gata3, Eomes and Ets2 in murine embryonic fibroblasts. The induced trophoblast stem cells are able to self-renew and are almost identical to blastocyst derived trophoblast stem cells in terms of morphology, marker gene expression and methylation pattern. Functional in vitro and in vivo assays confirm that these cells are able to differentiate along the trophoblast lineage generating polyploid trophoblast giant cells and chimerizing the placenta when injected into blastocysts. The induction of trophoblast stem cells from somatic tissue opens new avenues to study genetic and epigenetic characteristics of this extra-embryonic lineage and offers the possibility to generate trophoblast stem cell lines without destroying the respective embryo. 

PMID: 27500445
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان