یک رویکرد موثر ex vivo برای القای سلول های پیش ساز اندوتلیالی از سلول های CD34+ خون بند ناف

تاریخ انتشار: چهارشنبه 27 بهمن 1395 | امتیاز: Article Rating

پیشینه:

پیوند سلول های پیش ساز اندوتلیالی(EPCs)/ سلول های اندوتلیالی به دلیل ظرفیت بالایشان برای تولید فاکتور 8 و برای ترمیم آسیب عرقی، برای درمان بیماری های ایسکمی و هموفیلی A استفاده شده اند. ما رویکرد موثری را برای تحریک تکثیر و تمایز سلول های پیش ساز اندوتلیالی برای کاربردهای درمانی بالقوه ایجاد کرده ایم.

روش ها:

سلول های CD34+ جداسازی شده از خون بند ناف انسانی در دو سیستم دو مرحله ای برای 21 روزه کشت شدند. سلول های چسبنده تولید شده از طریق فلوسایتومتری و رنگ آنیز ایمونوفلورسنس مورد ویژگی یابی قرار داده شدند. علاوه براین، کلونی زایی تک سلولی و سنجش ایجاد لول، برای ارزیابی پتانسیل آن ها برای تکثیر و تشکیل شبکه عروقی انجام گرفت. علاوه براین، این سلول ها بوسیله تزریق سیاهرگ پورت کبدی به یک مدل موشی آسیب اندوتلیوم سینوزوئید کبدی تزریق شد تا رفتار in vivo آن ها بررسی شود.

نتایج:

پروتکل کشت دو مرحله ایف تکثیر و تمایز سلول های CD34+ خون بند ناف را به طور موثری افزایش داد که منجر به ایجاد شمار زیادی از سلول های چسبنده ظرف مدت سه هفته شد. سلول های چسبنده تولید شده بر مبنای بیان CD31، CD144، vWF و فاکتور هشت انعقادی به عنوان سلول های پیش ساز اندوتلیالی(EPCs)/ سلول های اندوتلیالی شناسایی شدند و تعداد سلول ها افزایش 140 برابری را در مقایسه با سلول های اولیه نشان داد. علاوه براین، این سلول های پیش ساز اندوتلیالی(EPCs)/ سلول های اندوتلیالی قادر به تکثیر و تثبیت کلونی ها به صورت سلول های منفرد و تشکیل دهنده ساختارهای شبه لوله ای بودند. به طور قابل توجه تر، ارزیابی های بافتی موش بعد از پیوند نشان داد که سلول های پیش ساز اندوتلیالی(EPCs)/ سلول های اندوتلیالی ترزیق شده مهاجرت کرده و با کبد تلفیق شده اند و بخش های اندوتلیالی سینوزوئید را بازسازی کنند.

بحث:

ما رویکردی را برای تولید سلول های پیش ساز اندوتلیالی(EPCs)/ سلول های اندوتلیالی مشتق از خون بند ناف در مقیاس وسیع ایجاد کردیم، آن ها را خصوصیت یابی کردیم و ظرفیت عملکردی آن ها در in vivo را نشان دادیم. روش ما یک منبع عالی از سلول های پیش ساز اندوتلیالی(EPCs)/ سلول های اندوتلیالی سالم را برای استفاده در سلول درمانی در بالین ارائه می کند.

Stem Cell Res Ther. 2017 Feb 7;8(1):25. doi: 10.1186/s13287-017-0482-9.

An effective ex-vivo approach for inducing endothelial progenitor cells from umbilical cord blood CD34+ cells.

Qin M1,2, Guan X1, Wang H1,2, Zhang Y1, Shen B1, Zhang Q1,3, Dai W1,4, Ma Y1,5, Jiang Y6,7.

Abstract

BACKGROUND:

Transplantation of endothelial progenitor cells (EPCs)/endothelial cells (ECs) has been used for the treatment of ischemic diseases and hemophilia A, due to their great capacity for producing factor VIII and for repairing vascular damage. We established an effective approach to stimulate the expansion and differentiation of EPCs for potential therapeutic applications.

METHODS:

CD34+ cells isolated from human cord blood were cultured in a two-step system for 21 days. The generated adherent cells were characterized via flow cytometry and immunofluorescent staining. Moreover, single-cell clonogenic and tube-forming assays were carried out to evaluate their potential to proliferate and form vessel networks. Furthermore, these cells were transplanted into a mouse model of hepatic sinusoidal endothelium injury by hepatic portal vein injection to investigate their in-vivo behavior.

RESULTS:

The two-step culture protocol promoted the expansion and differentiation of human cord blood CD34+ cells efficiently, resulting in a large number of adherent cells within 3 weeks. The generated adherent cells were identified as EPCs/ECs based on the expression of CD31, CD144, vWF, and FVIII, and cell numbers showed a 1400-fold increase compared with the initial number. Moreover, these EPCs/ECs were capable of proliferating and establishing colonies as individual cells, and forming tube-like structures. More significantly, tissue examination of mice after transplantation revealed that the injected EPCs/ECs migrated and integrated into the liver, reconstituting the sinusoidal endothelial compartment.

CONCLUSIONS:

We developed an approach for the generation of cord blood-derived EPCs/ECs on a large scale, characterized them phenotypically, and demonstrated their in-vivo functional capacity. Our approach provides an excellent source of healthy EPCs/ECs for use in cell therapy in a clinical setting.

PMID: 28173870
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان