ترانسفکشن در یک سیستم کشت سلولی میکروفلوئیدیک پرفیوژ شده: مطالعه ای موردی

تاریخ انتشار: دوشنبه 24 مهر 1396 | امتیاز: Article Rating

دستگاه های میکروفلوئیدیک خودکار، مسیری امیدوار کننده به سمت سلول درمانی اتولوگ هستند. گام های اولیه تولید سلول های بنیادی پرتوان القایی(iPSC) شامل ترانسفکشن و کشت های سلولی طولانی است. یکپارچه کردن این گام ها به کاهش هزینه سیستم کشت میکرو با کاربرد در بازبرنامه ریزی سلولی و تصحیح ژن ها خواهد بود. مثال های فعلی یکپارچه سازی ترانسفکشن بیشتر روی به حداکثر رساندن کارایی فوکوس کرده اند تا این که روی کشت های طولانی مدت نظر داشته باشند. در این جا ما بدنبال توانایی سازش پذیری کامل فرایند بوسیله یکپارچه سازی ترانسفکشن خودکار با سیستم میکروفلوئیدیک پرفیوژنی بوده ایم که برای شرایط کشت هموژن طراحی شده بود. فرایند تزریق با استفاده از فلورسین مشخص شد تا یک LabVIEW-based routine برای اتوماسیون تعریف شده بوسیله کاربر ایجاد کند.این امر بوسیله ترانسفکت شیمیایی یک پلازمید GFP درون سلول های بنیادی جنینی موشی(mESCs) نشان داده شد. سلول های ترانسفکت شده درون سیستم یک بهبودی کارایی(34%, n = 3) را در مقایسه با پروتکل های استاندارد نشان دادند(17.2%, n = 3). این اولین گام به سمت سیستم های فرآوری میکروفلوئیدیک برای بازبرنامه ریزی یا ژن درمانی را ارائه می کند.

Process Biochem. 2017 Aug;59(Pt B):297-302. doi: 10.1016/j.procbio.2016.09.006.

Transfection in perfused microfluidic cell culture devices: A case study.

Raimes W1, Rubi M1, Super A1, Marques MPC1, Veraitch F1, Szita N1.

Abstract

Automated microfluidic devices are a promising route towards a point-of-care autologous cell therapy. The initial steps of induced pluripotent stem cell (iPSC) derivation involve transfection and long term cell culture. Integration of these steps would help reduce the cost and footprint of micro-scale devices with applications in cell reprogramming or gene correction. Current examples of transfection integration focus on maximising efficiency rather than viable long-term culture. Here we look for whole process compatibility by integrating automated transfection with a perfused microfluidic device designed for homogeneous culture conditions. The injection process was characterised using fluorescein to establish a LabVIEW-based routine for user-defined automation. Proof-of-concept is demonstrated by chemically transfecting a GFP plasmid into mouse embryonic stem cells (mESCs). Cells transfected in the device showed an improvement in efficiency (34%, n = 3) compared with standard protocols (17.2%, n = 3). This represents a first step towards microfluidic processing systems for cell reprogramming or gene therapy.

PMID: 28989299
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان