تمایز غضروفی تشدید شده سلول های بنیادی پرتوان القایی انسانی بوسیلهmicroRNA-140 و فاکتور TGFβ3

تاریخ انتشار: جمعه 11 اسفند 1396 | امتیاز: Article Rating

سلول های بنیادی پرتوان القایی(iPSCs) منبع جذابی را برای طب بازساختی ایجاد کرده اند. هدف مطالعه ما ایجاد یک روش جدید برای تمایز iPSCهای انسانی به کندروسیت ها بوسیله بیش بیان microRNA-140(miR-140) و استفاده از فاکتور TGFβ3 در سیستم کشت با تراکم سلولی بالا بود. ما وکتورهایی را آماده کردیم که برای تولید لنتی ویروس نوترکیب در سلول های HEK-293 استفاده شدند. سلول های ترانسداکت شده انتخاب شده و در سیستم کشت پلت(رسوب) کشت داده شده و بعد از 7، 14 و 21 روز بدست آمدند. سنجش real-time PCR برای ارزیابی ژن های خاص غضروف در سطح mRNA صورت گرفت. هم چنین، به منظور اثبات نتایج مان، ما سنجش ایمنولوژیک نیز انجام دادیم. سلول های iPSCs با لنتی ویروس نوترکیب ترانسداکت شده و miR-140 بیان شد. روش های ایمنولوژیک ثابت کرد که تمایز iPSCها به سمت کندروسیت ها با مدیریت ژن های ماتریکس غضروفی همراه بوده است. هم چنین real-time PCR نشان داد که در iPSCهای ترانسداکت شده در مقایسه با iPSCهای ترانسداکت نشده، بیان کلاژن نوع دو، SOX9 و اگریکان به طور قابل توجهی افزایش یافته و بیان کلاژن نوع یک کاهش یافت. در مجموع، داده های ما نشان می دهد که miR-140 یک القا کننده بالقوه تمایز غضروفی برای iPSCها است و هم چنین ما با استفاده از بیش بیان miR-140 و TGFβ3 تمایز غضروفی افزایش یافته را نشان دادیم.

Biologicals. 2018 Feb 15. pii: S1045-1056(18)30021-6. doi: 10.1016/j.biologicals.2018.01.005. [Epub ahead of print]

Enhanced chondrogenesis differentiation of human induced pluripotent stem cells by MicroRNA-140 and transforming growth factor beta 3 (TGFβ3).

Mahboudi H1, Soleimani M2, Enderami SE3, Kehtari M3, Ardeshirylajimi A4, Eftekhary M1, Kazemi B5.

Abstract

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) make an attractive source for regenerative medicine. The objective of our study was to establish a new method for differentiation of human iPSCs toward chondrocyte by overexpression of MicroRNA-140 (miR-140) and use of transforming growth factor beta 3 (TGFβ3) in high-cell density culture systems. We prepared vectors and then was used for recombinant Lenti virus production in HEK-293 cell. Transducted cells were selected and cultured in pellet culture system and were harvested after days 7, 14 and 21. Real-time PCR was performed to evaluate the cartilage-specific genes in the mRNA levels. Also, in order to confirm our results, we have done immunological assay. iPSCs were transducted with recombinant Lenti virus and miR-140 was expressed. Immunological methods confirmed that differentiation of iPSC toward chondrocyte with handling cartilage matrix genes. Also real time PCR demonstrated that in transducted iPSCs significantly increased gene expression of collagen type II, SOX9 and aggrecan, and down-regulated expression of collagen type I when compared to the mRNA levels measured in non transducted iPSCs. In Conclusion, our data implies that miR-140 is a potent chondrogenic differentiation inducer for iPSCs and also, we have showed increasing chondrogenic differentiation by using overexpression of miR-140 and TGFβ3.

PMID: 29456027
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان