اثر اسید کافئیک روی حفاظت انجمادی سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی نوع A

تاریخ انتشار: جمعه 11 آبان 1397 | امتیاز: Article Rating

پیشینه:

 روش های درمان سرطان می توانند منجر به ناباروری مردان شوند. به همین دلیل، حفاظت انجمادی سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی(SSC) و پیوند سلول به فرد بعد از دوره درمان برای حل مشکل ناباروری، گزینه مناسبی است. حفاظت انجمادی سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی، فرایند مهمی است که می تواند به بازگشت اسپرماتوژنز کمک کند. با این حال، طی این فرایند، سلول های بنیادی اغلب آسیب می بینند که ارزش آن ها را برای آزمایش و درمان پایین می آورد. اسید کافئیک(CA) یک آنتی اکسیدان است که نشان داده شده است زنده مانی سلول ها را تحت شرایط استرس افزایش می دهد. هدف این مطالعه بررسی اثر اسید کافئیک روی حفاظت انجمادی سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی بود.

روش ها:

 سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی از بیضه موش های Balb/c جداسازی شدند و در ظروف پوشیده از لامینین کشت شدند و با استفاده از میکرو بیدهای CD90 خالص سازی شدند و در ادامه در محیط ویتریفیکیشن کامل شده با اسید کافئیک 10 میکرو مولار  و از طریق فرایند فریز کردن آهسته یا سریع حفاظت انجمادی شدند. بعد از ذوب کردن، زنده مانی سلولی ارزیابی شد. بیان ژن های Bax، Fas، Bcl-2 و P53 بوسیله real-time PCR تعیین شد. الکتروفورز ژل برای اثبات نتایج real-time PCR استفاده شد.

نتایج:

مشاهده شد زنده مانی سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی که سریع فریز شدند و با اسید کافئیک تیمار شدند، در مقایسه با گروه های کنترل کاهش یافتند(p < 0.003). زنده مانی سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی که اسید کافئیک را دریافتند و متحمل فریز شدن آهسته شدند در مقایسه با گروه های کنترل به طور قابل توجهی کاهش یافت(). سطح بیان BAX، BCL-2 و Fas در گروه فریز-ذوب سریع تغییر قابل توجهی نداشت. با این حال، نشان داده شد سطح بیان p53 افزایش می یابد. در گروه سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی که متحمل فرایند فریز آهسته شدند، سطح بیان ژن BAX افزایش یافت، در حالی که سطح بیان ژن BCL-2 کاهش یافت. تغییر قابل توجهی در سطح بیان Fas و P53 تشخیص داده نشد. زمانی که گروه هایی که مورد تیمار با اسید کافئیک قرار گرفته بودند مقایسه شدند، سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی سریعا فریز شده، تنظیم افزایشی بیان Fas و P53 و تنظیم کاهشی Bcl-2 و Bax را نشان دادند.

جمع بندی:

اسید کافئیک ممکن است سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی سالم را طی فرایند حفاظت انجمادی و از طریق تحریک آپوپتوز در سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی آسیب دیده حفاظت کند. کامل کردن محیط ویتریفیکاسیون با اسید کافئیک اثر ارجح تری روی حفاظت سلول های بنیادی اسپرماتوگونیایی دارد.

Rep Biochem Mol Biol. 2018 Oct;7(1):85-93.

The Effect of Caffeic Acid on Spermatogonial Stem Cell-type A Cryopreservation.

Sayed Mahdi N1, Azarbani F1, Pirnia A2, Abbaszadeh A2, Gholami M2,3.

Abstract

Background:

Cancer treatment methods can lead to male infertility .in this regard, cryopreservation of spermatogonial stem cells (SSC) and cell-to-person transplantation after the course of treatment to resolve the problem of infertility is a good one. The cryopreservation of SSC is an important process as it can help on the return of spermatogenesis. However, during this process, the stem cells often become damaged which degrades their value for experiments and treatments. Caffeic acid (CA) is an antioxidant that has been shown to increase the viability of cells under stress. The aim of this study was to investigate the effect of CA has on spermatogonial stem cell (SSC) cryopreservation.

Methods:

Spermatogonial stem cells isolated from the testes of Balb/c mice pups were cultured in laminincoated dishes, purified using CD90.1 microbeads, then cryopreserved in vitrification media supplemented with 10 µM CA either through a slow or rapid freezing process. After thawing, cell viability was evaluated. Expression of Bax, Fas, Bcl-2 and P53 genes was determined by real-time PCR. Gel electrophoresis was used to confirm the results of the real-time PCR.

Results:

The viability of the SSCs that were rapidly frozen and treated with CA was observed to be significantly reduced compared to the control group (p < 0.003). The viability SSCs that received CA and underwent the slow freezing treatment was significantly reduced compared to controls (p < 0.002). The expression levels of BAX, BCL-2, and Fas in the rapid freeze-thaw group didn't significantly change. However, the levels of P53 expression were shown to increase. In the group of SSCs that underwent the slow freezing process, the BAX gene expression levels increased, while the levels of BCL-2 gene expression decreased. No significant changes in the level of Fas and P53 expression were detected. When comparing the groups that received CA treatment, SSCs that were rapidly frozen showed an up-regulation of Fas and P53 expression and a down-regulation of Bcl-2 and Bax expression.

Conclusion:

Caffeic acid may protect intact SCCs during the cryopreservation process through stimulating the induction of apoptosis in injured SSCs. Supplementing the vitrification media with CA has a superior effect on the preservation of SSCs.

PMID: 30324122
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان