القای سلول های بنیادی مزانشیمی پریتونئوم موشی به سلول های شبه سلول های زایا با استفاده از محیط شرطی مایع فولیکولی و سلول های کومولوس

تاریخ انتشار: ﺳﻪشنبه 14 اسفند 1397 | امتیاز: Article Rating

رده های مزوتلیوم پریتونئوم، حفره های بدنی را مفروش می کنند و دارای منشا یکسانی با اپی تلیوم سطح تخمدان هستند که وجود احتمالی سلول های بنیادی مزانشیمی پریتونئوم(PMSCs) را می توان از جمله این مشترکات دانست. در مطالعه حاضر، PMSCها از پریتونئوم جداسازی شده و با استفاده از محیط شرطی مایع فولیکول انسانی(HFF) و سلول های کومولوس انسانی(HCCM) به سلول های شبه سلول تخمدانی تمایز یافتند. اکسپلنت های دیواره قدامی شکمی و پریتونئوم روده ای برای جداسازی سلول ها و کشت آن ها در محیط DMEM استفاده شد. بعد از سه پاساژ، PMSCهای خالص سازی شده برای مورفولوژی، نرخ تکثیر و زنده مانی سلولی شان ارزیابی شدند. سپس PMSCهای جداسازی شده متحمل دو رویکرد ویژگی یابی شدند: 1) تمایز به رده های مزودرمی و 2) بیان مارکرهای مزانشیمی(CD90 و CD44) و مارکر سلول های اپی تلیالی(CK19). سلول های PMSC جداسازی شده با استفاده از HFF ده درصد و HCCM 50درصد  طی یک بازه 21 روزه به سلول های شبه سلول های تخمدانی تمایز یافتند و بیان مارکرهای اووسیتی(Zp3, Gdf9)، سلول های زایا(Ddx4, Dazl)؛ سلول های گرانولوزا(Amh) و سلول های تکا(Lhr) با استفاده از Real-time PCR و سنجش ایمنوفلورسنس ارزیابی شد. هر دو سلول های بنیادی مزانشیمی دیواره قدامی شکمی و پریتونئوم روده ای(AP-MSCs و IP-MSCs) مشخصه های مزانشیمی را نشان داد و به آدیپوسیت و استئوسیت تمایز یافتند. سلول های AP-MSC، مارکرهای خاص سلول های مزانشیمی و اپی تلیالی را بیش از IP-MSCها بیان کردند و نرخ تکثیر بهتری نیز نشان دادند. سلول های AP-MSC و IP-MSC مارکرهای خاص سلول زایا و اووسیت را بیان کردند و این بیان در هفته سوم کشت افزایش یافت. در هر دو گروه AP-MSC و IP-MSC، بیان ژن های Gdf9، Ddx4، Dazl، ZP3 و Amh تنها تحت القای HCCM در روز 21 در مقایسه با روز 0 تنظیم افزایشی قابل توجهی را نشان داد. اما در سنتز پروتئین همه ژن های ذکر شده، هر دو محیط HFF و JCCM اثر القایی یکسانی را در روز 21 در مقایسه با روز 0 نشان دادند. علاوه بر این، LHR‌در هیچ کدام از گروه ها بیان نشد. در نهایت، در هر دو رویکرد ویژگی یابی و تمایز، AP-MSCs در مقایسه با IP-MSCها به القا کننده ها بهتر پاسخ دادند.

Stem Cells Dev. 2019 Feb 15. doi: 10.1089/scd.2018.0149. [Epub ahead of print]

Induction of mouse peritoneum mesenchymal stem cells into germ cell-like cells using follicular fluid and cumulus cells conditioned media.

Mirzaeian L1,2, Eftekhari-Yazdi P3, Esfandiari F4,5, Eivazkhani F6, Rezazadeh Valojerdi M7,8, Moini A9,10,11, Fathi R12.

Abstract

The peritoneum mesothelium lines body cavities and has the same origin as ovarian surface epithelium with probable existence of peritoneum mesenchymal stem cells (PMSCs). In the present research, PMSCs were isolated from peritoneum and differentiated into ovarian cell like cells using human follicular fluid (HFF) and human cumulus conditioned medium (HCCM). Anterior abdominal wall and intestinal peritoneum explants were used for cells isolation and cultured in DMEM. After passage 3, purified PMSCs were assessed for morphology, proliferation rate and cell viability. Then isolated PMSCs underwent two characterization procedures: 1) differentiation to mesodermal lineage and 2) expression of mesenchymal (CD90 and CD44) and epithelial cell (CK19) markers. The characterized PMSCs were differentiated into ovarian cell-like cells using 10% HFF and 50% HCCM for 21 days and the expressions of oocyte (Zp3, Gdf9), germ cell (Ddx4, Dazl), granulosa cell (Amh) and theca cell (Lhr) markers were assessed using real-time PCR and immunocytofluorescence assay. Both anterior abdominal wall and intestinal peritoneum mesenchymal stem cells (AP-MSCs and IP-MSCs) showed mesenchymal characters and differentiated to adipocyte and osteocyte. AP-MSCs expressed mesenchymal and epithelial cell specific markers more than IP-MSCs and showed an analytically better proliferation rate. The induced AP-MSCs and IP-MSCs were expressed germ and oocyte cell specific markers and this expression increased in the 3rd week of culture. In both groups of AP and IP-MSCs, the expressions of Gdf9, Zp3, Ddx4, Dazl and Amh genes under just HCCM induction showed upregulation significantly in on the 21st day of culture compared to day 0. But in protein synthesis of all mentioned genes, both HFF and HCCM had equal induction effect on the 21st day of culture against the 0th day. In addition, LHR was not expressed in any groups. Finally, in both characterization and differentiation procedures, the AP-MSCs respond to inducers better than IP-MSCs.

PMID: 30767610
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان