آنالیز ردیابی کلونی در دوره های زمانی برای ارزیابی فرایندهای مربوط به کشت سلول های بنیادی پرتوان القایی

تاریخ انتشار: پنجشنبه 16 اسفند 1397 | امتیاز: Article Rating

افزایش محصول و حفظ کیفیت بالای سلول های بنیادی پرتوان القایی(iPSCs) برای تولید iPSCها در مقیاس صنعتی ضروری است. با این حال، به دلیل این که iPSCها ظریف هستند، ارزیابی کیفیت آن ها طی پردازش مهم است. برای ارزیابی وضعیت iPSCهای کشت شده به صورت غیر تهاجمی، ارزیابی کلونی iPSC مبتنی بر مورفولوژی ممکن است یک تکنولوژی موثر برای مونیتور کردن و آنالیز کردن وضعیت سلول باشد. در این مطالعه، ما موثر بودن آنالیز ردیابی کلونی در دوره های زمانی را برای ارزیابی فرایندهای کشت سلول iPS ارزیابی کردیم. به طور ویژه، ما داده های زمانی دقیقی را برای ارزیابی اثر تکنیک پیپت کردن روی تک تک کردن سلول ها قبل از کشت بدست آوردیم. اگرچه فرایند پیپت کردن منجر به اعمال تنش برشی شدید روی سلول  می شود که روی کیفیت آن ها اثر می گذارد، این اثرات به دلیل پیچیدگی آن ها و پارامترهای کنترل نشده به طور کمی آنالیز نشده است. با آنالیز پاسخ های ناهمگونی و دوره زمانی مربوط به کلونی های منفرد، آنالیزهای ردیابی کلونی ما یک جمعیت شدیدا آسیب دیده ناشی از استرس پیپت کردن را نشان داد که در آنالیزهای حجیم متداول قابل تشخیص نیستند. علاوه بر این، با آنالیز جامع داده های ردیابی کلونی که مورفولوژی دوره زمانی و نتایج رنگ آمیز مارکری با هر کلونی را مربوط می سازند، ما دریافتیم که مورفولوژی کلونی تنها ارتباط بسیار زیادی با مارکر تمایز نیافته در مراحل پایانی و ارتباط کمی با مراحل اولیه دارد. بنابراین، زمانی که فرایندهای پیچیده تولید iPSC ارزیابی شود، آنالیز ردیابی کلونی راهی را برای کمی سازی اطلاعات مورفولوژی سلولی ارائه می دهد.

J Biosci Bioeng. 2019 Feb 7. pii: S1389-1723(18)30952-6. doi: 10.1016/j.jbiosc.2019.01.011. [Epub ahead of print]

Time-course colony tracking analysis for evaluating induced pluripotent stem cell culture processes.

Yoshida K1, Okada M1, Nagasaka R1, Sasaki H2, Okada M1, Kanie K1, Kato R3.

Abstract

Increasing the yield and maintaining a high quality of induced pluripotent stem cells (iPSCs) is necessary for manufacturing iPSCs at the industrial scale. However, because iPSCs are delicate, it is important to evaluate their quality during processing. To examine the status of cultured iPSCs non-invasively, morphology-based iPSC colony evaluation may be an efficient technology for cellular status monitoring and analysis. In this study, we examined the effectiveness of time-course colony tracking analysis for evaluating the iPSC culture process. Particularly, we obtained detailed time-course data to evaluate the effect of the pipetting technique on cell dissociation before seeding. Although the pipetting process causes severe shear stress to cells, which affects their quality, these effects have not been quantitatively analyzed because of their complex and uncontrollable parameters. By analyzing the heterogeneity and time-course responses of individual colonies, our colony tracking analysis revealed a critically damaged population caused by pipetting stress which could not be detected in conventional bulk analysis. Moreover, by comprehensively analyzing colony tracking data, which links the time-course morphology and marker staining results with each colony, we found that colony morphology is only highly correlated with the undifferentiated marker in the final stage, with a lower correlation in the early stages. Thus, colony tracking analysis provides a way to quantify cellular morphological information when evaluating complex iPSC manufacturing processes.

PMID: 30738731
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان