فاکتورهای رشد و گیرنده های آنها از سلول های آمنیوتیک انسانی در شرایط in vitro مشتق شدند

تاریخ انتشار: پنجشنبه 24 مهر 1393 | امتیاز: Article Rating

مطالعات in vitro نشان داده است که عوامل رشد تولید شده توسط آمنیون در رگ زایی، اپیتلیال سازی مجدد وتعدیل سیستم ایمنی شرکت می کنند. هدف از مطالعه حاضر، بررسی عوامل رشد و گیرنده های تولید شده توسط بافت آمنیون و سلول های آمنیوتیک انسان بود. آمنیون انسان (hAM) جدا شده، و حلقه های آمنیون برای تجزیه و تحلیل در شرایط آزمایشگاهی تشریح شد. برخی از قطعات آمنیون با استفاده از روشهای مختلف هضم برای به دست آوردن دو بخش سلولی تجزیه شد که توسط مارکرهای سلولهای مزانشیمی و اپیتلیالی مورد آنالیز قرار گرفت. قطعات آمنیون و بخش های سلولی آمنیوتیک انسانی در یک محیط فاقد پروتئین کشت شدند. پروتئین های ترشح شده به محیط کشت با آنتی بادی فاکتور رشد انسانی مورد آنالیز قرارگرفت. این محیط کشت به سلول های اپی تلیال ورید بندناف انسان  (HUVECs) برای تست القا مهاجرت (scratch test) و تکثیر (بیان نشانگرهای Ki67) اضافه شد. بخش سلولی 1 هر دو مارکر سیتوکراتین و سلول های مزانشیمی را  بیان کردند که نشان دهنده مخلوطی از سلول های اپیتلیال انسانی (hAECs)  و سلول های استرومایی مزانشیمی (hAMSCs) است. بخش سلولی 2 عمدتا سیتوکراتین را بیان کردند، بنابراین، به عنوان سلول های اپیتلیال انسانی در نظر گرفته شدند. ترشح پروتئین ها توسط سلول ها با گذشت زمان افزایش یافت; آمنیون کشت یافته انسان EGF-R، IGF، IGFBP-2-3-6  را ترشح کرد. سلول های بخش  1  NT-4 را ترشح کردند، در حالی که سلول های بخش 2 G-CSF، M-CSF و PDGF را ترشح کردند. محیط کشت به دست آمده ازکشت hAM مهاجرت HUVECs را القا کرد. ما برای اولین بارنشان دادیم که آمنیون انسان و سلول های آمنیوتیک IGFBP-6، MCSF-R، PDGF-AB، FGF-6، IGFBP-4، NT-4 و VEGF-R3 را ترشح می کنند. ما دریافتیم که بخش سلولی 1، بخش سلولی 2، و کل آمنیون احتمالا به علت نسبت های مختلف سلول های مشتق از آمنیون و تعاملات مختلف سلول- سلول پروتئین های مختلفی را ترشح می کنند. فاکتورهای سلولی پرده آمنیوتیک انسانی در شرایط آزمایشگاهی فعال باقی مانده و مهاجرت شدید HUVECs را القا می کنند. فاکتورهای رشد و گیرنده های موجود در آمنیون و یا محیط کشت سلول های آمنیوتیک ممکن است برای طب ترمیمی مورد استفاده قرار گیرند.

Folia Histochem Cytobiol. 2014;52(3):163-70. doi: 10.5603/FHC.2014.0019.

Growth factors and their receptors derived from human amniotic cells in vitro.

Grzywocz ZPius-Sadowska EKlos PGryzik MWasilewska DAleksandrowicz BDworczynska MSabalinska SHoser GMachalinski BKawiak J1.

 

Abstract

In vitro studies have shown that amnion-produced growth factors participated in angiogenesis, re-epithelialization, and immunomodulation. The aim of our study was to investigate the growth factors and receptors produced by human amnion tissue and amniotic cells. Human amnions (hAM) were isolated, and amnion circles were dissected for in vitro analysis. Some amnion fragments were digested by the use of different methods to obtain two cell fractions, which were analysed for mesenchymal and epithelial cell markers. Amniotic circles and human amniotic cell fractions were cultured in a protein-free medium. Proteins secreted into the culture medium were analysed with a human growth factor antibody array. Conditioned culture media were added to human umbilical vein epithelial cells (HUVECs) to test for stimulation of migration (scratch test) and proliferation (Ki67 expression). Fraction 1 cells expressed both cytokeratin and mesenchymal cell markers which indicated that it was composed of a mixture of human amnion epithelial cells (hAECs) and mesenchymal stromal cells (hAMSCs). Fraction 2 cells mainly expressed cytokeratin and, therefore, were designed as hAECs. Secretion of proteins by the cultured cells increased with time. The hAM cultures secreted EGF-R, IGF, and IGFBP-2,-3 and -6; Cell Fraction 1 secreted NT-4, whereas Cell Fraction 2 secreted G-CSF, M-CSF, and PDGF. Conditioned media of hAM cultures stimulated HUVECs migration. We have showed for the first time that human amnions and amniotic cells secreted IGFBP-6, MCSF-R, PDGF-AB, FGF-6, IGFBP-4, NT-4, and VEGF-R3. We found that Cell Fraction 1, Cell Fraction 2, and the whole amnion secreted different proteins, possibly due to different proportions of amnion-derived cells and different cell-cell interactions. The hAM cell factors remained functional in vitro and induced intensified migration of HUVECs. The growth factors and receptors found in amnion or amniotic cell media might be used for regenerative medicine.

PMID: 25308731
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان