یک پروتکل بسیار بهینه برای بازبرنامه ریزی سلول های سرطانی به پرتوانی با استفاده از وکتورهای پلاسمید غیر ویروسی

تاریخ انتشار: دوشنبه 11 اسفند 1393 | امتیاز: Article Rating

برخلاف جذابیت های قابل ملاحظه در این زمینه، بازبرنامه ریزی سلول های بنیادی پرتوان القاشده(iPSCs) از سلول های سرطانی با چالش هایی مواجه است که شامل راندمان بازبرنامه ریزی بسیار پایین و ناپایداری سلول های بنیادی پرتوان القا شده مشتق از سرطان(C-iPSCs) است. در این مطالعه، ما بر آن هستیم که موانع عمده که بازبرنامه ریزی سلول های سرطانی را محدود می کنند شناسایی کنیم. از طریق بهینه سازی کینتیک چند بعدی مفصل، یک پروتوکل بسیار بهینه شده برای بازبرنامه ریزی سلول های بنیادی پرتوان القا شده مشتق از سرطان با استفاده از وکتورهای پلاسمید غیر ویروسی تثبیت کردند. ما نشان دادیم چگونه تراکم اولیه سلول های سرطانی کشت شده می تواند حیاتی ترین فاکتوری باشد که نهایتا روی بازبرنامه ریزی سلول های بنیادی پرتوان القا شده مشتق از سرطان اثر می گذارد. ما دستاورد بی سابقه ای در مورد راندمان بالای بازبرنامه ریزی سلول های بنیادی پرتوان القا شده مشتق از سرطان و کلونی های بادوامی با مورفولوژی سلول های بنیادی پرتوان القا شده مشخص داشته ایم که بیش از 50 درصد آن ها مارکرهای فنوتیپیک(Oct3/4، Sox2، Nanog) و مارکرهای آنزیمی(آلکالین فسفاتاز) سلو لهای بنیادی پرتوان القا شده را داشته اند. علاوه براین، سلول های بنیادی پرتوان القا شده مشتق از سرطان تثبیت شده نشان دادند که قادرند در in vivo تراتوما ایجاد کنند که شامل انواع سلول ها و بافت های مشتق از سه لایه زایای جنینی هستند که به طور کامل با کسب پرتوانی مطابقت دارد. این پروتکل در دو رده سلول سرطانی غیر مرتبط با انسان به نام آدنوکارسینومای ریوی(A549) و ملانومای موشی(B16f10) تست شد و یک روش ارزشمند بالقوه برای تولید موثر سلول های بنیادی پرتوان القا شده مشتق از سرطان بدون ویروس برای کاربرد در آینده ارائه داد.

Cell Reprogram. 2015 Feb;17(1):7-18. doi: 10.1089/cell.2014.0046. Epub 2014 Dec 30.

A highly optimized protocol for reprogramming cancer cells to pluripotency using nonviral plasmid vectors.

Zhao H1Davies TJNing JChang YSachamitr PSattler SFairchild PJHuang FP.

 

Abstract

In spite of considerable interest in the field, reprogramming induced pluripotent stem cells (iPSCs) directly from cancer cells has encountered considerable challenges, including the extremely low reprogramming efficiency and instability of cancer-derived iPSCs (C-iPSCs). In this study, we aimed to identify the main obstacles that limit cancer cell reprogramming. Through a detailed multidimensional kinetic optimization, a highly optimized protocol is established for reprogramming C-iPSCs using nonviral plasmid vectors. We demonstrated how the initial cancer cell density seeded could be the most critical factor ultimately affecting C-iPSCs reprogramming. We have consistently achieved an unprecedented high C-iPSCreprogramming efficiency, establishing stable colonies with typical iPSC morphology, up to 50% of which express the iPSC phenotypic (Oct3/4, Sox2, Nanog) and enzymatic (alkaline phosphatase) markers. Furthermore, established C-iPSC lines were shown to be capable of forming teratomas in vivo, containing cell types and tissues from each of the embryonic germ layers, fully consistent with their acquisition of pluripotency. This protocol was tested and confirmed in two completely unrelated human lung adenocarcinoma (A549) and mouse melanoma (B16f10) cancer cell lines and thus offers a potentially valuable method for generating effectively virus-free C-iPSCs for future applications.

PMID: 25549177
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان