تولید سلول های تولید کننده انسولین از سلول های بنیادی پرتوان القایی انسانی با استفاده از پروتکل تمایزی بهینه سازی شده مرحله ای با استفاده از پلاسمای غنی از پلاکت

تاریخ انتشار: جمعه 24 دی 1395 | امتیاز: Article Rating

مطالعه روی سلول های بنیادی پرتوان القایی انسانی مشتق از بیماران و هم چنین مجموعه ای فاکتوری رشد اتولوگ احتمالا مزایای بسیاری از آن ها برای درمان های جایگزین مبتنی بر سلول در بیماران مبتلا به دیابت شیرین نوع یک(TIDM) در آینده را آشکار خواهد ساخت. به همین منظور، ما پروتکلی چند مرحله ای را با اضافه کردن پلاسمای غنی از پلاکت(PRP) تثبیت کرده ایم که سلول های بنیادی پرتوان القایی انسانی(hiPSCs) را به سلول های تولید کننده انسولین(IPCs) القا می کند. در این جا ما پروتکل تمایزی پنج مرحله ای را دو گروه شامل پروتکل با استفاده از PRP‌و بدون استفاده از PRP‌ارائه کردیم. ویژگی های IPCهای مشتق شده در هر دو گروه در سطوح پروتئینی و mRNA، سیکل سلولی و زیستایی در مرحله نهایی تمایز سلولی ارزیابی شد. مطالعات آزمایشگاهی شامل تیمار hiPSCها در پروتکل با PRP منجر به سلول های تمایز یافته ای با مشخصه های قوی IPCها شامل سلول های شبه جزایری، بیان ژن های مارکز خاص بلوغ و عملکرد سلول های بتای پانکراسی شد. علاوه براین مارکرهای خاص پانکراسی بوسیله ایمنوسیتوشیمی و وسترن بلات نیز تشخیص داده شد. سلول های تمایز یافته ما در هر دو گروه انسولین و C-peptide را در تست تحریک گلوکزی ترشح کردند که بوسیله ELISA‌نشان داده شد. نتایج سنجش سیکل سلولی ثابت کرد تمایز صورت گرفته است. ما برای اولین بار گزارش کردیم که PRP ممکن است ماده ایده آلی در محیط کشت برای القای تمایز پانکراسی hiPSCها باشد. این مطالعه رویکرد جدیدی را برای بررسی نقش PRP در پروتکل های تمایز پانکراسی ارائه می دهد و سهولت استفاده از iPSCهای مشتق از بیماران و PRP‌اتولوگ برای درمان های جایگزین سلول های بتا در دیابت نوع یک را تقویت می کند.

J Cell Physiol. 2016 Dec 7. doi: 10.1002/jcp.25721. [Epub ahead of print]

Generation of Insulin-Producing Cells from Human Induced Pluripotent Stem Cells Using a Stepwise Differentiation Protocol Optimized with Platelet-Rich Plasma.

Enderami SE1, Mortazavi Y1,2, Soleimani M3, Nadri S1, Biglari A4, Mansour RN5.

Abstract

Studies on patient-specific human-induced pluripotent stem cells (hiPSCs) as well as a series of autologous growth factors presumably will reveal their many benefits for cell base replacement therapy in type 1 diabetes mellitus (TIDM) patients in the future. For this purpose, we established a multistep protocol by adding platelet-rich plasma (PRP) that induce the hiPSCs into insulin-producing cells (IPCs). We present here a differentiation protocol consisting of five stages in two groups including protocol with PRP and without PRP. Characteristics of derived IPCs in both groups were evaluated at the mRNA and protein levels, cell cycle and viability in the end stage of cell differentiation. The in vitro studies indicated the treatment of hiPSCs in the protocol with PRP resulting in differentiated cells with strong characteristics of IPCs including islet-like cells, the expression of mature and functional pancreatic beta cell specific marker genes. In addition to these pancreatic specific markers were detected by immunochemistry and Western blot. Our differentiated cells in two groups secreted insulin and C-peptide in a glucose stimulation test by ELISA showing in vitro functional. The results of the cell cycle assay confirmed that differentiation has been done. We reported for the first time that PRP might be ideal additive in the culture medium to induce pancreatic differentiation in the hiPSCs. This study provides a new approach to investigate the role of PRP in pancreatic differentiation protocols and enhance the feasibility of using patient-specific iPSCs and autologous PRP for future beta cells replacement therapies for T1DM. This article is protected by copyright. All rights reserved.

PMID: 27925205
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان