تکثیر و تمایز سلول های بنیادی در تماس با محلول مشتق از غشای پلاسمایی غنی از فیبرین

تاریخ انتشار: جمعه 13 بهمن 1396 | امتیاز: Article Rating

هدف:

 ارزیابی توانایی محلول غشای پلاسمایی غنی از فیبرین(FRP) برای القای تکثیر و تمایز سلول های بنیادی مشتق از چربی انسانی(ASCs) به کندروسیت ها

روش:

 غشای پلاسمایی غنی از فیبرین بوسیله سانتریفیوژ کردن خون محیطی مشتق از دو اهدا کننده سالم بدست آمد، برید شده و در ظروف کشت برای 48 ساعت نگهداری شد تا محلول فیبرین بدست آید. SCATh با استفاده از محلول هضمی کلاژناز از بافت چربی جداسازی شد و در آزمایشگاه تکثیر شد. سلول ها تکثیر شده و با محیط کشت DMEM-F12، یک محیط تجاری برای تمایز غضروفی و حلول غشای پلاسمایی غنی از فیبرین به مدت سه روز تیمار شدند و برای ارزیابی های کمی تکثیر سلولی با استفاده از سیستم High-Content Operetta® imaging با BrdU نشان دار شدند. برای سنجش تمایز غضروفی، SCATh در ریز توده هایی برای 21 روز رشد کردند و برای ارزیابی کیفیبا استفاده از میکروسکوپ نوری با تولوئیدین بلو رنگ آمیزی شدند. آنالیزهای آماری با استفاده از ANOVA و تست Tukey’s انجام گرفت.

نتایج:

 در مقایسه با سایر گروه های تیماری، سلول های تیمار شده با محلول غشای پلاسمایی غنی شده با فیبرین تکثیر بالاتری را نشان دادند، به نحوی که تست ANOVA سطح معناداری p < 0.001 را نشان داد. تمایز به کندروسیت ها بوسیله حضور موکوپلی ساکاریدها در ماتریکس سلولی مشاهده شد که با رنگ آمیزی تولوئیدین بلو و اگریکان مشخص شد.

جمع بندی:

تیمار با محلول غشای پلاسمایی غنی از فیبرین، تکثیر سلولی را تحریک کرد و تمایز سلول های بنیادی به کندروسیت ها را القا کرد که نشان دهنده کاربرد بالقوه غشای پلاسمایی غنی از فیبرین در درمان بازسای غضروف هیالین است.

Rev Bras Ortop. 2017 Dec 12;53(1):45-52. doi: 10.1016/j.rboe.2017.12.004. eCollection 2018 Jan-Feb.

Proliferation and differentiation of stem cells in contact with eluate from fibrin-rich plasma membrane.

Souza FG1, Fernandes BL1, Rebelatto CLK1, Aguiar AM2, Fracaro L1, Brofman PRS1.

Abstract

in English, Portuguese

Objective:

To evaluate the ability of the eluate from fibrin-rich plasma (FRP) membrane to induce proliferation and differentiation of isolated human adipose-derived stem cells (ASCs) into chondrocytes.

Method:

FRP membranes were obtained by centrifugation of peripheral blood from two healthy donors, cut, and maintained in culture plate wells for 48 h to prepare the fibrin eluate. The SCATh were isolated from adipose tissue by collagenase digestion solution, and expanded in vitro. Cells were expanded and treated with DMEM-F12 culture, a commercial media for chondrogenic differentiation, and eluate from FRP membrane for three days, and labeled with BrdU for quantitative assessment of cell proliferation using the High-Content Operetta® imaging system. For the chondrogenic differentiation assay, the SCATh were grown in micromass for 21 days and stained with toluidine blue and aggrecan for qualitative evaluation by light microscopy. The statistical analysis was performed using ANOVA and Tukey's test.

Results:

There was a greater proliferation of cells treated with the eluate from FRP membrane compared to the other two treatments, where the ANOVA test showed significance (p < 0.001). The differentiation into chondrocytes was visualized by the presence of mucopolysaccharide in the matrix of the cells marked in blue toluidine and aggrecan.

Conclusions:

Treatment with eluate from FRP membrane stimulated cell proliferation and induced differentiation of the stem cells into chondrocytes, suggesting a potential application of FRP membranes in hyaline cartilage regeneration therapies.

PMID: 29367906
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان