تنظیم و مکانیسم miR-148a روی تمایز کاردیومیوسیتی ناشی از 5-aza در سلول های بنیادی مزانشیمی
تاریخ انتشار: جمعه 22 تیر 1397
| امتیاز:
هدف:
بررسی بیان miR-148a در فرایند تمایز میوکاردی سلول های بنیادی مزانشیمی(hMSCs) القا شده بوسیله 5-آزاسایتدین(5-aza) و مطالعه اثرات miR-148a روی تمایز میوکاردی hMSCها.
روش ها:
آنالیز ایمنوفلورسنس برای تشخیص بیان ژن مشخصه تمایز قلبی(α-MHC) در فرایند تمایز میوکاردی hMSCهای القا شده بوسیله 5-aza استفاده شد. تکنیک های qRT-PCR و وسترن بلات، به ترتیب برای آنالیز بیان miR-148a و DNMT1 بعد از تمایز میوکاردی hMSCها استفاده شد. بیان α-MHC بعد از ترانسفکشن با مقلدهای سنتتیک miR-148 و مهارکننده miR-148a بوسیله وسترن بلات آنالیز شد. ما از آنالیزهای بیوانفورماتیکی برای پیش بینی هدف بالقوه miR-148a و از سیستم گزارش ژن لوسیفرازی دو گانه برای اثبات این پیش بینی استفاده شد. بعد از کو ترانسفکشن با مهار کننده های DNMT1shRNA و miR-148a، سلول های hMSC برای کشف نقش تنظیمی و مکانیسم miR-148a در فرایند تمایز میوکاردی hMSCها استفاده شد.
نتایج:
مارکر α-MHC بعد از القا با 5-آزاسیتیدین به طور قابل توجهی افزایش یافت.. miR-148a به طور قابل توجهی در تمایز کاردیومیوسیتی hMACها افزایش یافت، در حالی که سطح بیان ژن و پروتئین DNMT1 به طور قابل توجهی در این فرایند کاهش یافت(P<0.01). زمانی که miR-148a طی تمایز کاردیومیوسیتی القا شد و افزایش بیان یافت، بیان α-MHC به طور قابل توجهی در hMScها افزایش یافت. در عوض، تنظیم کاهشی miR-148a بیان α-MHC (P<0.01) را سرکوب کرد. ناک دان کردن DNMT1 نقش miR-148a را در تمایز hMACها بلوک کرد.
جمع بندی:
miR-148a در تمایز کاردیومیوسیتی hMSCها افزایش یافت و miR-148a تمایز میوکاردی hMSCها را از طریق هدف قرار دادن DNMT1 افزایش داد.
Zhongguo Ying Yong Sheng Li Xue Za Zhi. 2017 Jun 8;33(6):514-518. doi: 10.12047/j.cjap.5601.2017.122.
[Regulation and mechanism of miR-148a on cardiomyocyte differentiation induced by 5-aza in mesenchymal stem cells].
[Article in Chinese]
Jiang CK1, Gong F1.
Abstract
OBJECTIVE:
To investigate the expression of miR-148a in the process of myocardial differentiation of human mesenchymal stem cells (hMSCs) induced by 5-azacytidine (5-aza) and study the effects of miR-148a on myocardial differentiation of hMSCs.
METHODS:
The immunofluorescence analysis was used to detect the expressions of the associated mark genes of cardiac specific protein (α-MHC) in the process of myocardial differentiation of hMSCs induced by 5-aza. qRT-PCR and Western blot were used to analysis the expressions of miR-148a and DNA methyltransferase 1 (DNMT1) after myocardial differentiation of hMSCs, respectively. The expression of α-MHC after transfection with synthetic miR-148 mimics and miR-148a inhibitor was examined by Western blot. We used bioinformatics analysis to predict the potential target of miR-148a, and the dual luciferase report gene system was used to verify the predication. After co-transfected with DNMT1 shRNA and miR-148a inhibitors, hMSCs were used to explore the regulatory role and mechnism of miR-148a in the process of myocardial differentiation of hMSCs.
RESULTS:
α-MHC was increased significantly after induced by 5-azacytidine. miR-148a was increased significantly in cardiomyocyte differentiation of hMSCs, while the gene and protein expression levels of DNMT1 were decreased significantly in this progress (P<0.01). The expression of α-MHC was up-regulated significantly in hMSCs when miR-148a was induced into cardiomyocyte differentiation and overexpressed. Instead, downregulation of miR-148a suppressed α-MHC expression (P<0.01). Knockdown of DNMT1 blocked the role of miR-148a in differentiation of hMSCs.
CONCLUSIONS:
miR-148a was upregulated in cardiomyocyte differentiation of hMSCs, and miR-148a promoted myocardial differentiation of hMSCs via targeting DNMT1.
PMID: 29931900