راهی برای تولید موش ناک اوت شده ژنی با استفاده از ویرایش ژن میانجی شده با sgRNA/Cas9 dual

تاریخ انتشار: شنبه 15 دی 1397 | امتیاز: Article Rating

مدل های جانوری ابزار غیر قابل انکاری برای پروژه های تحقیقاتی زیست پزشکی و مطالعات تکوینی و بیماری ها هستند. مدل های موشی ترانسژن ارائه کننده فنوتیپ های خاص بیماری مربوط به بتا-هموگلوبینوپاتی، پیش از این تولید شده اند. با این حال، روش های مرسوم برای هدف قرار دادن ژن ها در موش و سلول های بنیادی جنینی بسیار کاربر و زمان بر هستند. اخیرا، CRISPR برای تسهیل و بهبود مدیفیکاسیون های ژنومی در موش یا رده های سلولی ایزوژن ایجاد شده است. استفاده از CRISPR برای مدیفیکاسیون های ژنی، مراحل زمان بر رویکردهای متداول از جمله انتخاب کلون های هدفمند سلول های بنیادی جنینی و تولید موش های کایمرا را حذف می کند. این مطالعه نشان می دهد که ریز تزریق یا میکرواینجکشن یک پلاسمید DNA‌کد کننده پروتئین Cas9 همراه با sgRNAهای دو گانه مختص به ژن Hbb-bs (هموگلوبین، زنجیره بتای بالغ)، شکستن توالی های هدف در جایگاه های اگزون 2 و 3 را مقدور می سازد. این تزریقات منجر به یک آلل ناک اوت با کارایی حدود 10 درصد برای حذف اگزون 2 و 3 و 20 درصد برای جهش ایندل بود.

Anal Biochem. 2018 Dec 26. pii: S0003-2697(18)30934-5. doi: 10.1016/j.ab.2018.12.002. [Epub ahead of print]

Pipeline for the generation of gene knockout mice using dual sgRNA CRISPR/Cas9-mediated gene editing.

Ghassemi B1, Shamsara M2, Soleimani M3, Kiani J4, Rassoulzadegan M5.

Abstract

Animal models possess undeniable utility for progress on biomedical research projects and developmental and disease studies. Transgenic mouse models recreating specific disease phenotypes associated with β-hemoglobinopathies have been developed previously. However, traditional methods for gene targeting in mouse using embryonic stem (ES) cell are laborious and time consuming. Recently, CRISPR has been developed to facilitate and improve genomic modifications in mouse or isogenic cell lines. Applying CRISPR to gene modification eliminates the time consuming steps of traditional approach including selection of targeted ES cell clones and production of chimeric mouse. This study shows that microinjection of a plasmid DNA encoding Cas9 protein along with dual sgRNAs specific to Hbb-bs gene (hemoglobin, beta adult s chain) enables breaking target sequences at exons 2 and 3 positions. The injections led to a knockout allele with efficiency around 10% for deletion of exons 2 and 3 and 20% for indel mutation.

PMID: 30593779
ثبت امتیاز
نظرات
در حال حاضر هیچ نظری ثبت نشده است. شما می توانید اولین نفری باشید که نظر می دهید.
ارسال نظر جدید

تصویر امنیتی
کد امنیتی را وارد نمایید:

آرشیو سالانه
آرشیو سالانه
نظرات خوانندگان
نظرات خوانندگان